Hua

Ko te ahua o te whakakotahitanga o nga huringa tukutahi ki te whakarereke i te mahi enzymatic kaore i te ngawari te matapae na te mea ehara enei paanga i te taapiri i nga wa katoa i roto i te tikanga raina.No reira, ko te tohu o nga paanga o nga huringa tukutahi o nga toenga waikawa amino e here ana i te tïpako ka whai waahi nui ki te mohio ki te motuhake o te tïpako o nga whaa.I roto i te beta-glycosidase mai i Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), nga toenga e rua o Q39 me E451 e pahekoheko ana me te tïpako he mea nui tenei mo te tautuhi i te motuhake o te tïpako.Ko nga mutants rua o Sfbetagly (A451E39, S451E39 me S451N39) i whakaritea e te mutagenesis a-pae, ka whakaatuhia ki te huakita ka purea ma te whakamahi i te chromatography affinity.I tohuhia enei enzyme ma te whakamahi i te p-nitrophenyl beta-galactoside me te p-nitrophenyl beta-fucoside hei taputapu.Ko te ōwehenga k cat/Km mo nga mutants kotahi me te rua o Sfbetagly kei roto i nga huringa-a-papa i nga waahi Q39 me E451 i whakamahia hei whakaatu i te paanga ki te kaha korekore o te ESdouble dagger (enzyme-transition state complex) o nga huringa rua (Gdouble ko te daggerxy) ehara i te kohinga o nga paanga ka puta mai i nga huringa kotahi (Gdouble daggerx me Gdouble daggery).Ko tenei rereketanga i roto i te hoari Gdouble e tohu ana ko nga paanga o nga whakarereketanga kotahi ka whiti etahi waahanga.No reira, kotahi noa te tatau o tenei paanga noa i roto i te Gdouble daggerxy.Ko nga raraunga tioata mo te beta-glycosidases e whakaatu ana i te noho mai o te here hauwai bidentate e whai waahi ana nga toenga Q39 me E451 me te roopu hydroxyl ano o te tïpako.No reira, ko nga raraunga whakamaarama me nga raraunga tioata e whakaatu ana ko nga toenga Q39 me te E451 ka whai awe tahi ki o raatau taunekeneke me te taputapu.