Hua

He maha nga wa e whakamahia ana te tote Tris acetate i roto i te whakarite i te tote TAE (Tris-acetate-EDTA), e whakamahia ana hei peera rere me nga reera agarose.Tris Acetate-EDTA buffer e whakamahia ana mo te DNA agarose gel electrophoresis engari e whakamahia ana hoki mo te kore -denaturing RNA agarose gel electrophoresis.Ko te DNA paerua-rua ka tere ake te oma i roto i te TAE i era atu papaaru, a ka ruha pea i te wa roa o te electrophoresis.Ka taea e te tohanga buffer, te whakakapi ranei i te parepare i te wa roa o te electrophoresis te whakaora i te iti o te kaha buffering.Ka taea te whakamahi i nga momo kukū hei ako i te nekeneke o te DNA i roto i te otinga.I te mea ko te borate i roto i te TBE buffer (Tris-Borate-EDTA Buffer, 10X Powder Pack, sc-296651) he aukati kaha mo te maha o nga enzymes, ka tūtohuhia te TAE buffer ina titiro ki nga tono enzymatic mo te tauira DNA.Ko te tote acetate Tris he parepare me te aro nui ki nga whakamatautau ATP me te firefly luciferase.

Nga Whakamahinga: Ko te kaitarai rere TAE te nuinga o te whakamahi mo te DNA agarose gel electrophoresis, ka whakamahia hoki mo te RNA agarose gel electrophoresis taketake.Ko te DNA paerua-rua ka tere ake te neke i roto i te TAE i era atu papaaru, engari karekau hoki ki te kauhoe na te paunga o nga katote aukati i te wa roa o te electrophoresis.Ka taea e te paihikara paihikara, te whakawhiti parepare ranei i te wa roa o te electrophoresis te utu mo te iti o te kaha o te paatete.2 Waimehaehae i te parepare TAE kukū kia whiwhi 1 mMTAE parepare kei roto 40 mM Tris acetate me 1 mM EDTA, pH 8.3.1 mMTAE pūreirei ka taea te whakamahi i roto i nga kaera agarose me te hei parepare rere.Mo te taumira teitei, e taunaki ana kia iti ake te ngaohiko tono i te 5V/cm (te tawhiti i waenga i nga hikohiko wae).

Taupānga: TAE rere parepare Ko te pūreirei tino whakamahia mo te DNA agarose gel electrophoresis i roto i te Chemicalbook gel, a ka whakamahia hoki mo te RNA agarose gel electrophoresis kore-denaturing.Ko te DNA paerua-rua ka tere ake te neke i roto i te TAE i era atu papaaru, engari karekau hoki ki te kauhoe na te paunga o nga katote aukati i te wa roa o te electrophoresis.Ka taea e te paihikara paihikara, te whakawhiti parepare ranei i te wa roa o te electrophoresis te utu mo te iti o te kaha o te paatete.I diluted te parepare TAE concentrated ki te whiwhi 1 mMTAE buffer kei roto 40 mM Tris acetate me te 1 mM EDTA, pH 8.3.1 mMTAE pūreirei ka taea te whakamahi i roto i nga kaera agarose me te hei parepare rere.Mo te taumira teitei, e taunaki ana kia iti ake te ngaohiko tono i te 5V/cm (te tawhiti i waenga i nga hikohiko wae).

Nga Whakamahinga: I roto i te kitenga o te ATP me te firefly luciferase, ko tenei hua te tino parepare tairongo;te kitenga herenga glutamate.

Ka taea te herea o te [3H]l-glutamic acid ki nga taonga kore-receptor.

[3H]L-glutamic acid e herea ana ki nga ngongo microfuge me te karaihe i tirotirohia i roto i nga papa e wha.He iti te here o te papamuri ki enei rauemi, engari i whakanuia e te centrifugation, i te momi ranei i roto i te buffer Tris-HCl me Tris-citrate.He iti rawa tenei here, I te wa ranei i whakamahia te HEPES-KOH, Tris-acetate buffer ranei.[3H]L-glutamate here ki ngongo microfuge i aukatihia e te L- engari ehara i te D-isomers o te glutamate me te aspartate.Ko te waikawa DL-2-amino-7-phosphonoheptanoic hoki kaore i aukati i te here.Ko etahi atu o nga puhui i whakaatu i te aukati iti ki te ngawari ko: N-methyl-D-aspartate, quisqualate, L-glutamic acid diethyl ester, N-methyl-L-aspartate, kainate, me te 2-amino-4 -phosphonobutyrate.I aukatihia te herea e nga kiriuhi roro kiore kua whakahekehia.Ko te herenga pūmua [3H] glutamate i riro mai me te takai kiripaka toka-whakarewa i te wa i mahia ai te here ki roto i te buffer Tris-acetate.E taunaki ana kia whakamahia te parepare Tris-acetate, HEPES -KOH ranei i roto i te glutamate bin ding assay.Mena ka whakamahia te parepare Tris-HCl, Tris-citrate ranei, me mahi nga whakamatautau whakahaere tika hei whakatika mo te here ki nga ngongo microfuge, ki nga tātari muka karaihe ranei.