Hua

Ko te tātaritanga o nga kaupapa phosphorylation-whanui he wero nui tonu na te nui o te uaua o nga whatunga phosphorylation pūmua.I roto i tenei mahi, ka arotakehia e matou te whakauru o Lys-N, Lys-C, me te trypsin mo o raatau kaha ki te whai waahi ki te tātaritanga o te ao o te phosphoproteome.I whakamahia he putanga parakore o te whakawhiti cation kaha iti-pH ki te wehe tika i nga peptides kua whakahiatotia, phosphorylated, me te kore whakarereketia.E 5036 te katoa o nga phosphopeptides kore e taea te tautuhi me te reeti kitenga teka o <1% mai i te 1 mg o te pūmua ma te whakamahi i te huinga o nga enzymes e toru.I kitea e o maatau raraunga ko te īnaki i waenga i nga huinga raraunga phosphopeptide i hangaia me nga momo porotease he iti noa iho, engari ko te inaki i waenga i nga huinga raraunga tryptic e rua i hangaia he 4 nga wa teitei ake.Ma tenei ara, na te whakamahi whakarara o Lys-N me te trypsin i taea te pikinga 72% o te maha o nga phosphopeptides kua kitea i te whakatairitea ki te trypsin anake, engari na te whakamatautau tauira trypsin i hua noa ki te 25% te pikinga.Na, i te wa e aro noa ana ki nga raraunga trypsin me Lys-N, i kitea e matou nga 4671 phosphopeptides kore.Ko etahi atu tātaritanga o nga waahi i kitea i kitea ko nga huinga raraunga Lys-N me te trypsin i whakarangatirahia i roto i nga momo phosphorylation tino rereke, me te whakaatu ano he mea tino nui nga huarahi multiprotease i roto i nga tātaritanga phosphoproteome.